Bewertung der Antikörperstabilität mittels Nano-Dynamischer-Differenzkalorimeter

Nicie Murphy | Morgan Ulrich
August 29, 2022

Antikörperstabilität ist ausschlaggebend für die Leistung von Antikörpern in Therapeutika. Hohe Thermostabilitäten von Antikörpern sind wichtig für die Herstellung von Produkten mit angemessener Haltbarkeit und zur Vermeidung von Problemen durch Verlust der biophysikalischen Eigenschaften des Antikörpers.1
Viele Antikörper, insbesondere monoklonale Antikörper, sind sehr kostenintensiv in der Herstellung.2 Viele Syntheseverfahren erzielen am Ende der Aufreinigung nur einige Milligramm, was bedeutet, dass die Charakterisierung und Qualitätskontrolle der Proben mit minimalen Mengen auskommen müssen. Für einige Analysemethoden sind unter Umständen zerstörungsfreie Verfahren wie die Raman-Spektroskopie geeignet, allerdings eignen sich diese nicht immer zur Evaluierung der Antikörperstabilität. Eine weitere Möglichkeit ist die Nutzung von Nano-Dynamischen Differenzkalorimetern (nano differential scanning calorimetery, Nano-DSC), eines der besten Verfahren zur Bestimmung der Antikörperstabilität bei minimaler Probenvorbereitung und äußerst geringem Probenverbrauch.

Wie kann ich Antikörperstabilität einfach und bei geringerem Probeneinsatz messen?

Ein Nano-Dynamisches Differenzkalorimeter misst die Temperaturänderungen durch Entfalten oder Denaturierung des Antikörpers. Die Auswertung der Thermogramme des Nano-DSC liefert nicht nur Informationen, ob das Protein stabil bleibt, sondern auch über die Arten der Denaturierung, die sich aus der Auswertung der Signale und Peakformen ergeben.

Das Nano DSC von TA Instruments ist ein hochempfindliches Differenzkalorimeter für die zuverlässige Messung der Stabilität von Antikörpern und anderen Makromolekülen. Das Nano DSC ist einfach zu bedienen und kann Messungen mit nur 2 µg Probe durchführen. Damit ist es das ideale Nano-Dynamische Differenzkalorimeter zur Überwachung der Antikörperstabilität für Routine- und Forschungszwecke.

Was ist Nano DSC und wie misst es die Antikörperstabilität?

Das Nano DSC ist ein dynamisches Differenzkalorimeter, dass die absorbierte oder freigegebene Wärme bei Erwärmen oder Kühlen von verdünnten Biomolekülen in Lösung misst. Während die dynamische Differenzkalorimetrie für zahlreiche Anwendungen im Bereich Pharmazeutika, Elektrogeräte, Verbundstoffe und mehr eingesetzt werden kann, wurde das Nano DSC speziell entwickelt, um thermische Änderungen in Biomolekülen zu messen.

Das Nano DSC von TA Instruments ist das branchenführende, vielseitig konfigurierbare Nano-Dynamische Differenzkalorimeter. Mit diesem Differenzkalorimeter kann die Antikörperstabilität durch Anwenden von Temperaturrampen an sehr kleinen Probenmengen mit großer Sensitivität gemessen werden. Durch Messen der freigesetzten oder aufgenommenen Reaktionswärme können Schwachstellen der Proteinstabilität im Thermogramm identifiziert und zur Charakterisierung der Probe genutzt werden.

Warum ist die Messung der Antikörperstabilität wichtig?

Viele biologische Moleküle, darunter auch Antikörper, weisen eine sehr enge Struktur-Funktionsbeziehung auf. Unerwünschtes Entfalten, bei dem die zwischenmolekularen Wechselwirkungen zwischen verschiedenen Regionen des Antikörpers gestört werden, ist ein Vorgang, der zur Verschlechterung der gewünschten biophysikalischen Eigenschaften führen kann.1 Der Einsatz es Nano-DSC für diese Messungen liefert auch allgemeine Strukturinformationen und kann zur Untersuchung von Bindungsereignissen und insbesondere von Protein-Ligand-Wechselwirkungen herangezogen werden.

Das Messen der Antikörperstabilität in der Forschungs- und Entwicklungsphase neuer therapeutischer Antikörper ist sehr wichtig, da die Stabilität oft ein im Rahmen des Forschungsprozesses zu berücksichtigender Designparameter ist.3

Warum ist das Nano DSC die beste Option zur Messung der Antikörperstabilität?

Forscherinnen und Forscher entscheiden sich aus mehreren Gründen für das Nano DSC. Mit dem Nano DSC lassen sich im Vergleich zu Geräten anderer Anbieter qualitativ hochwertigere Daten bei geringerem Probenverbrauch erzielen. Das einzigartige Design der Kapillar-Platinzelle mit einem Volumen von 300 µl ist für eine einfache Beladung mit höchster Reproduzierbarkeit und Sensitivität konzipiert.

Das Nano DSC bietet Ihnen die Flexibilität, eigene Testmethoden zu entwickeln. Mit einer großen Auswahl an Zubehören lässt sich das Gerät perfekt an Ihre Anwendung und die Anforderungen Ihres Labors anpassen. Eine Möglichkeit ist die Integration eines Autosamplers, der mit bis zu zwei 96-Well-Platten kompatibel ist. So können Sie Ihr Nano-DSC starten und ohne Aufsicht laufen lassen. Programmierungsoptionen für Waschsequenzen mit Ausgängen für Puffer- und Lösungsmittellösungen sind über die Betriebssoftware des Nano DSC verfügbar.

Mit dem Autosampler für das Nano DSC lassen sich Produktivität und Durchsatz erhöhen. Die Daten können direkt in die NanoAnalyze-Software zur Modellanpassung und Batchverarbeitung importiert werden, um die Extraktion wichtiger Parameter für Ihre Antikörperstabilitätsanalyse zu beschleunigen.

Wenden Sie sich noch heute an TA Instruments, um eine Expertenmeinung einzuholen, wie die dynamischen Nano-Differenzkalorimetrie Ihre Antikörperstabilitätsanalyse vereinfachen kann.

Literaturnachweise:

  1. Mcconnell, A. D., Zhang, X., Macomber, J. L., Chau, B., Sheffer, J. C., Rahmanian, S., Hare, E., Spasojevic, V., Horlick, R. A., King, D. J., & Bowers, P. M. (2014). A general approach to antibody thermostabilization. MAbs, 6(5), 1274–1282. http://dx.doi.org/10.4161/mabs.29680
  2. Samaranayake, Haritha, Thomas Wirth, Diana Schenkwein, Jani K. Räty, and Seppo Ylä-Herttuala. 2009. „Challenges in Monoclonal Antibody-Based Therapies.“ Annals of Medicine 41(5):322–31. doi: 10.1080/07853890802698842
  3. Ma, Hui, Ciarán Ó’Fágáin, and Richard O’Kennedy. 2020. „Antibody Stability: A Key to Performance – Analysis, Influences and Improvement.“ Biochimie 177:213–25. doi: 10.1016/j.biochi.2020.08.019.